1614 年，大坂冬之陣爆發。伊達軍對真田丸發動攻擊。
活用地利，於高處迎擊的真田丸。從城壁伸出狙擊德川軍的槍口上閃著詭譎光芒。
「真田幸村」（三木真一郎 飾）是日後被評為「日本第一兵」的稀世戰鬥武將。在大坂冬之陣建築了稱為真田丸的堡壘，並高舉繡有六文錢的旗幟，率領精兵與德川大軍上演了一場激戰。
烏雲密佈的大阪之冬。在真田丸裡，幸村、佐助，以及瑪麗亞各自的想法相互交錯著。
憑依於真田幸村身上的是「炎駒（えんく）」與「蛇目蝶（じゃのめちょう）」兩隻守護靈。「炎駒」是掌管「仁義」的靈獸「麒麟」的一種，全身纏繞著火炎。而「蛇目蝶」則是從遊戲本篇裡敗給威廉的義父 ‧ 大谷吉繼繼承而來。
「猿飛佐助」（諏訪部 順一 飾）從各國學會眾多的武藝及忍術，於靠近信州上田一帶的戶隱流之里，與幸村相遇並成為他的部下。在幸村進入大坂城後，仍舊像影子一般跟隨幸村，努力不懈為他效命。
真田十勇士其中一人，猿飛佐助。舉起擅長的旋棍，擺出備戰姿勢。
與伊賀流頭目服部半藏展開忍術達人對戰。為爭奪黑暗世界的領土綻放激烈的戰火。
在新關卡「大坂冬之陣」裡的大坂城，雖是個三面環繞海洋與河川的天險之地，但唯有南方，是容易讓大軍布陣的平原地形。真田幸村為了應付勢必從南方展開攻勢的德川軍主力，於大阪城外牆外圍廣闊的無水護城河建造小型城寨真田丸，作為防衛據點。面對克服弱點的大坂城，德川軍慘遭滑鐵盧。
德川軍自英國引進蛇砲。將砲彈射向難攻不落的要塞 ‧ 真田丸。
新關卡「稻荷山」，據說此地是稻荷大神所降臨的聖域，日本各地稻荷神社的發源地。在山裡見到狐火活潑飛舞著的人都說，那是妖怪們正在舉行祭典。甚至傳說有人沿著參道穿過無數鳥居，步步醉心於那詭異的景色，最後失去自我永遠徘徊在山中。
新關卡「真田丸」，是將位於高台上的寺廟改造為兵舍的城寨。幸村除運用高處所產生的地利，建築巨大的壕溝提升防禦力，還擴建寺廟的地下道來打通聯絡網。此稱「真田的秘道」，用於讓忍眾突襲殲滅攻來的敵人，也可供政要逃脫。
威廉巧妙運用旋棍，給予身穿紅色盔甲的真田軍士兵最後一擊。一般也被稱為拐棍的此種武器，有著出色的攻擊次數，擅長削減對手氣力。防禦上也很好使，是攻防一體的武器，但由於攻擊距離短因此必須接近對手。
「針之坊」是由老舊的針及破損的刃物聚集而成的妖怪。普遍認為針或刃物等物品特別容易妖怪化，而仍能使用卻被丟棄，或是因不當使用而破損的物品，會因此抱持怨恨妖怪化。
以迅速動作襲擊威廉的「忍犬」。
傳說中以猿飛佐助為首，連名字都沒出現於歷史舞台上，卻在背後大力支持幸村的真田十勇士。他們做好背水一戰的覺悟迎戰敵人，雖為人類卻仍舊不能小覷。
新守護靈「滑瓢」，是個擁有大頭老人外貌的守護靈。有一說祂是從活了漫長歲月的章魚所演變而來。擁有影響他人認知，讓人無法摸清真實的力量。為此自古便形容祂是個「滑頭」無法捉摸的存在。以守護靈之姿傳承於支持伊達家的「擅於謀略之人」之間。將眾多經驗與廣大知識，以加護的形式賦予主人，將滑瓢當作守護靈的人所構築的謀略可說是毫無破綻。
新守護靈「炎駒」，是擁有宛如馬匹般強力的四隻腳，與兩隻角的守護靈。是掌管「仁義」的靈獸「麒麟」的一種，全身纏繞著火炎。麒麟被視為獸類之長，不喜愛無謂的殺生，連昆蟲及花草都會刻意避開，極富慈悲心的存在。然而若眼見同伴遭受危機，依然會不吝施展祂強大的力量。另外擁有出色才能的年輕人被稱為麒麟兒，其典故也是來自於此。
支線任務「妖神樂」，充斥著妖怪的稻荷山。本應是神之使者的狐狸卻發狂成為「妖狐」，並襲擊威廉。
支線任務「妖神樂」，以忍者套裝及旋棍驅逐敵人（陰陽師）。
新道具「天狗的團扇」，是天狗所持的團扇。使用後將於前方引起龍捲風，撕裂周遭的敵人。
新道具「風箭符（ふうせんふ）」，是封入了強大風之力的陰陽術咒符。使用後將施放宛如複數箭矢般的暴風。
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